產(chǎn)品名稱	貨號(hào)	規(guī)格	應(yīng)用
PLT VASP/P2Y12	7014	10T	利用雙染流式細(xì)胞術(shù)，通過VASP的磷酸化作用，測定P2Y12受體活性。

 
1 簡介：
血管擴(kuò)張刺激磷蛋白（VASP）是一種重要的細(xì)胞內(nèi)血小板蛋白，基礎(chǔ)狀態(tài)下處于非磷酸化狀態(tài)。其磷酸化，是受cAMP (環(huán)磷酸腺苷) 級(jí)聯(lián)調(diào)節(jié)。前列腺素E1(PGE1)會(huì)激活級(jí)聯(lián)反應(yīng)，然而這種級(jí)聯(lián)調(diào)節(jié)通過P2Y12蛋白受體被ADP抑制。
在檢測時(shí)，VASP的磷酸化與P2Y12受體抑制效應(yīng)密切相關(guān)，而VASP的非磷酸化狀態(tài)與P2Y12 受體激活相關(guān)。
噻氯匹定和氯吡格雷對(duì)血小板受體的抑制作用是不可逆的。這種效應(yīng)通過PGE1的激活，同時(shí)ADP的加入，而使VASP保持磷酸化，而被證實(shí)。
本試劑盒利用雙色流式細(xì)胞測定術(shù)，通過VASP的磷酸化狀態(tài)的測定，從而檢測P2Y12受體活性。
2 方法：
先將全血單獨(dú)與PGE1孵育或與PGE1+ADP混合孵育。細(xì)胞滲透后，處于磷酸化狀態(tài)的VASP通過間接免疫熒光反應(yīng)特異性的被單克隆抗體標(biāo)記。使用雙色流式細(xì)胞分析測定單獨(dú)PGE1激活的和PGE1聯(lián)合ADP處理管的校準(zhǔn)平均熒光強(qiáng)度（mean fluorescence intensities,MF1），經(jīng)減去空白對(duì)照得到校正后的MFIc，即減去陰性對(duì)照之后的平均熒光強(qiáng)度。再計(jì)算血小板反應(yīng)指數(shù)（Platelet reactivity index，PRI），即VASP磷酸化水平，評(píng)估標(biāo)本中ADP抑制VASP磷酸化的程度。
3 試劑組成

名稱	組分
Reagent 1	1x 60ml 瓶，稀釋液。
Reagent 2a	1 x 100ul瓶，PGE1。
Reagent 2b	1 x 200ul瓶，PGE1 + ADP
Reagent 3	1 x 300ul 瓶，固定劑
Reagent 4a	1 x 200ul 瓶，抗VASP-P 小鼠單抗+滲透劑
Reagent 4b	1 x 100ul 瓶，陰性同型對(duì)照（小鼠單抗）+滲透劑
Reagent 5	1 x 300ul 瓶，染液，F(xiàn)ITC 標(biāo)記抗小鼠IgG多抗+血小板復(fù)染試劑 （抗CD61-PE標(biāo)記）+滲透劑

注：提供Reagent 2a和Reagent 2b是過剩的。
4 需要自備的試劑
 1）旋渦混勻器
 2）計(jì)時(shí)器
 3）流式細(xì)胞儀
 4）移液器、槍頭
 5）上樣管
5 試劑制備及保存
未開封包裝的試劑可在2-8℃條件下，至包裝上注明的有效期內(nèi)。
注：忌冷凍。
  所有試劑為即用型試劑，開封后，無污染的條件下，2-8℃可保持穩(wěn)定性2月。
注意：
  1）Reagent 3中含有2%-5%的多聚甲醛，吸入或皮膚接觸會(huì)引起過敏。請(qǐng)按要求安全操作。
2）所有試劑包含疊氮鈉(0.09%)防腐劑,請(qǐng)按要求操作，當(dāng)皮膚接觸到相關(guān)試劑時(shí)，用大量水徹底沖洗。