破骨細(xì)胞骨吸收功能檢測(cè)
背景簡(jiǎn)介：破骨細(xì)胞是一種多核的，具有骨吸收功能的骨組織細(xì)胞，在骨吸收過(guò)程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。破骨細(xì)胞骨吸收功能的異常會(huì)引發(fā)一系列的病癥，如骨質(zhì)疏松癥、關(guān)節(jié)置換術(shù)后假體松動(dòng)、骨硬化癥和牙周病變等。破骨細(xì)胞骨吸收功能的研究對(duì)于各類(lèi)骨疾病的防治具有重要意義。在破骨細(xì)胞骨吸收研究中，不僅要了解破骨細(xì)胞骨吸收過(guò)程，還需要評(píng)價(jià)破骨細(xì)胞的骨吸收功能。骨吸收陷窩形態(tài)分析法，被廣發(fā)用于評(píng)價(jià)破骨細(xì)胞骨吸收功能研究。
檢測(cè)原理：當(dāng)破骨細(xì)胞粘附在骨基質(zhì)表面，會(huì)在其骨基質(zhì)質(zhì)檢形成一個(gè)局部微酸環(huán)境，進(jìn)而發(fā)揮骨吸收功能兵形成吸收陷窩，即骨吸收陷窩。骨吸收陷窩是破骨細(xì)胞骨銷(xiāo)售的最直接結(jié)果，其數(shù)量，大小和深度能直接反映破骨細(xì)胞骨吸收的能力。骨吸收陷窩形態(tài)分析法是通過(guò)對(duì)骨吸收陷窩進(jìn)行形態(tài)計(jì)量分析，來(lái)評(píng)價(jià)破骨細(xì)胞骨吸收功能，該方法是目前判斷破骨細(xì)胞骨吸收功能的最可靠方法。
北京博蕾德生物技術(shù)有限公司提供用于200um, 400um 厚度破骨細(xì)胞骨吸收功能檢測(cè)骨切片，適用于96孔板檢測(cè)。產(chǎn)品描述：開(kāi)始骨吸收實(shí)驗(yàn)前用培養(yǎng)基重懸骨切片，成熟或早熟的破骨細(xì)胞，無(wú)論是由外周血單核細(xì)胞（PBMC）或共培養(yǎng)產(chǎn)生的，都可以將細(xì)胞分散覆蓋于骨切片上。根據(jù)破骨細(xì)胞的成熟形態(tài)和影響因素，凹點(diǎn)會(huì)在3-14天出現(xiàn)。破骨細(xì)胞數(shù)量可通過(guò)Tracp 活性實(shí)驗(yàn)來(lái)觀察，吸收凹點(diǎn)和溝可通過(guò)甲苯藍(lán)染色觀察（如圖2.）。
來(lái)源：骨切片由牛股骨的皮質(zhì)部分制成，完全適合96孔板，直徑6mm。
厚度：1）0.2mm（適用于免疫熒光，共聚焦實(shí)驗(yàn)）。
2）0.4mm（適用于下游分析）
儲(chǔ)存：置于4°C下96%乙醇中。
應(yīng)用：用于骨吸收實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，通過(guò)破骨細(xì)胞的骨吸收形成的吸收坑，可以用來(lái)監(jiān)測(cè)培養(yǎng)的破骨細(xì)胞的骨吸收情況，完全適合96孔板。
操作流程：該方法提供一種易于檢測(cè)的定量方案，用于體外測(cè)定破骨細(xì)胞介導(dǎo)的骨吸收。破骨細(xì)胞接種于骨切片上，吸收坑的形成可以通過(guò)甲苯胺藍(lán)染色進(jìn)行定量。
實(shí)驗(yàn)材料和試劑：
- 破骨細(xì)胞
- 骨切片
- 異丙醇
- 甲苯胺藍(lán)（Sigma cat#198161）
- 超純水
- 96孔細(xì)胞培養(yǎng)板（Greiner , Cat#650185）
實(shí)驗(yàn)設(shè)備：
- 骨形態(tài)測(cè)量系統(tǒng)(http://www.osteometrics.com/product_info.htm)
- 超聲波清洗器
操作流程：
- 破骨細(xì)胞接種于（250000 細(xì)胞/孔）含和不含顱骨成骨細(xì)胞的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上（提前孔內(nèi)放置骨切片）。
- 細(xì)胞在合適的培養(yǎng)基中37℃培養(yǎng)至少14天。
- 此后，用PBS洗滌細(xì)胞兩次，在250ul 70%異丙醇中，用超聲波高功率處理至少15分鐘，使細(xì)胞從骨切片脫落。
-
- 加入100ul 甲苯胺藍(lán)溶液（1%溶解于水），室溫染色2分鐘。
- 用250ul 超純水沖洗骨切片至少5次，以洗掉切片上的殘留物。
吸收坑被染成深藍(lán)色（圖1），吸收坑面積可以通過(guò)骨測(cè)量系統(tǒng)進(jìn)行量化或者吸收坑可通過(guò)光學(xué)顯微鏡觀察計(jì)數(shù)。
參考文獻(xiàn)：（以上流程來(lái)源于參考文獻(xiàn)，僅供參考）
Scholtysek, C., Katzenbeisser, J., Fu, H., Uderhardt, S., Ipseiz, N., Stoll, C., Zaiss, M. M.,
Stock, M., Donhauser, L., Bohm, C., Kleyer, A., Hess, A., Engelke, K., David, J. P.,
Djouad, F., Tuckermann, J. P., Desvergne, B., Schett, G. and Kronke, G. (2013).
PPARbeta/delta governs Wnt signaling and bone turnover. Nat Med 19(5): 608-613.
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規(guī)格 |
| Bone slice |
Bone Slices |
骨切片 |
250 |
50片（200um） |
| Bone slice |
Bone Slices |
骨切片 |
200 |
50片(400um) |
| IDS |
Bone Slices |
骨切片 |
DT-1BON1000-96 |
50片（200um |
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